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HPLC 法测定藏药白花秦艽不同部位中龙胆苦苷的含量

[   发布日期:2017-9-5   来源:成都普菲德生物技术有限公司   浏览次数:661   ]

摘 要: 目的: HPLC 法测定藏药白花秦艽不同部位中龙胆苦苷的含量。 方法: 采用 HPLC 法,色谱柱为Waters SunFireC18( 4. 6mm × 150mm,5μm) 。流动相为甲醇 - 水,流速 1. 0mL /min,检测波长 254nm。

结果: 龙胆苦苷在 0 05  2μg 呈良好的线性关系( r2 = 0 9996) ; 白花秦艽花和茎龙胆苦苷含量分别为 0 51570 1508mg·g  1 

结论: 所建立的 HPLC 法简便快捷准确度高,可用于藏药白花秦艽的质量控制

关键词: 白花秦艽花; 龙胆苦苷; HPLC; 含量测定

 

白花秦艽藏语解吉嘎保 Gentiana straminea Marin ,为龙胆科麻花秦艽,主要分布于西藏四川西部湖北西部甘肃宁夏,生长在海拔 2000  4950m 的山坡草地河滩,其以花入药,性味苦平,藏医临床用于清热消肿,龙胆苦苷是龙胆科植解毒热,治胃病文献报道该物的特征性成分,可用于理化鉴别和品质评价本文采用高效液相色谱法测定白花秦艽不同部位中的龙胆苦苷含量,进行含量分析,为藏药白花秦艽药材的质量控制提供科学依据

 

仪器与试药

 

1 1  仪器: Waters  e2695 高效液相色谱仪( 美国 Waters2998 型紫外检测器) ,PL202  L 型电子天平( Metteler ToleDo) 

1 2 试药: 龙胆苦苷中药对照品购于成都普菲德生物技术有限公司,批号: 130426; 白花秦艽药材采于西藏自治区林芝地区,经西藏自治区药材鉴定专家嘎务副教授鉴定为正品; 甲醇为色谱纯( 进口) ,水为去离子水,其他试剂均为分析纯

 

方法与结果

2 1  色谱条件及系统适用性试验: 色谱柱: Waters SunFire C18( 4 6mm × 150mm5μm) ; 流动相: 甲醇  水( 30: 70) ; 1 0mL /min; 检测波长: 254nm; 理论塔板数按龙胆苦苷峰算不低于 3000该条件下,龙胆苦苷对照品与供试品保留时间相同,如图 1 所示

 

1 龙胆苦苷与供试品高效液相色谱图

2 2 对照品溶液的配制: 精密称取已处理的龙胆苦苷对照品 0 0100g,加甲醇制成 10mL,浓度为 1 0mgμmL  1 的对照品溶液

 

2 3 供试品溶液的制备: 精密称取白花秦艽茎花样品粉末约 0 2g,分别置于 50mL 容量瓶中,加甲醇至刻度,超声处理 30min0 45μm 滤膜滤过,续滤液作供试品溶液

2 4 线性关系考察: 精密吸取对照品溶液 0 10 30 51 02 0mL,置于 10mL 容量瓶中,以甲醇定容至刻度,每次进样 10μL,依次注入高效液相色谱仪,得线性回归方程: Y = 7895 9X + 4752 5r2 = 0 9996结果表明,龙胆苦苷在

0 05  2μg 范围内呈良好的线性关系

2 5 精密度考察: 精密吸取一批对照品溶液,分别注入液相色谱仪,测定龙胆苦苷的峰面积,SD 为 0 99% ,结果显

示精密度良好

2 6 稳定性考察: 取同一供试品溶液,分别放置 048121824( h) ,注入液相色谱仪,测定龙胆苦苷峰面积,SD

2 41% ,表明在 24h 内基本稳定

2 7 重复性考察: 取同一样品粉末 6 份,按供试品溶液制备方法制备成样品溶液,分别注入液相色谱仪,依法测定龙胆苦苷峰面积,SD 为 1 91% 

2 8 加样回收率实验: 取已知含量的同一样品白花秦艽花粉末 5 份,每份约 0 1g,精密称定,精密加入对照品适量,按供试品溶液制备方法制备样品溶液,注入高效液相色谱仪,测定龙胆苦苷的峰面积,计算回收率,结果见表 1

1 加样回收率试验结果

取样量

样品中

加入量,

测得量

回收率 平均回收SD

成分

含量 /mg

/%

/g

/mg

/mg

/%

/%

0 0901

0 4646

0 5000

0 9290

96 37

0 1096

0 5652

0 5000

1 0184

95 63

龙胆

0 1123

0 5791

0 5000

1 0314

95 59

96 00

1 93

苦苷

0 1027

0 5296

0 5000

0 9648

94 32

0 1002

0 5167

0 5000

0 9985

98 09

含量测定

 

分别精密吸取白花秦艽不同部位供试品溶液各 10μL

注入高效液相色谱仪,按建立的方法测定龙胆苦苷的含量,

结果见表 2

2 白花秦艽茎花中龙胆苦苷的含量测定结果

编号

部位

含量 /mg·g  1

1

0 5157

2

0 1508

讨论

检测波长的选择: 采用 Waters  e2695 2998 型紫外检测器在 200  400nm 波长范围扫描,龙胆苦苷在 254nm 处

有最大吸收,选定 254nm 为检测波长

检测结果表明,白花秦艽不同部位中龙胆苦苷的含量存在较大差异,花的含量明显高于茎,与藏医临床用药部位

选择相符

 

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